生物細胞相關(guān)實(shí)驗

生物細胞相關(guān)實(shí)驗

　　篇一：巨噬細胞吞噬實(shí)驗&沉淀實(shí)驗實(shí)驗報告

　　【原理】巨噬細胞是單核吞噬細胞系統的主要細胞，局域活躍的吞噬功能。吞噬細胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明顯增強。

　　在小鼠體內誘導腹腔巨噬細胞產(chǎn)生后，再給小鼠腹腔注射雞血紅細胞，30min后處死小鼠，取出腹腔液，以冷亞甲藍染色，顯微鏡下計數吞噬紅細胞的百分數，及觀(guān)察吞噬細胞內雞紅細胞的數目，以判斷吞噬細胞的殺傷能力，由此間接地測定機體的非特異性免疫水平。

　　【方法】體內法：

　�。�1）實(shí)驗前3小時(shí)，小鼠腹腔注射6%無(wú)菌淀粉液1ml，誘導巨噬細胞滲出至腹腔中。

　�。�2）實(shí)驗時(shí)，每只小鼠注射雞紅細胞1ml，輕柔腹部，使其在腹腔中分布均勻，利于吞噬。

　�。�3）30min后，將小鼠拉頸處死，固定，打開(kāi)腹腔暴露腸管，用載玻片輕擦腹腔，使腹腔液均勻涂于載玻片過(guò)，再滴一滴0.03%冷亞甲藍溶液，蓋上蓋玻片。

　�。�4）高倍鏡下進(jìn)行觀(guān)察，計數。

　　【分析】

　　在小鼠體內誘導腹腔巨噬細胞產(chǎn)生后，再給小鼠注射雞紅細胞后鏡檢腹腔液，可觀(guān)察到巨噬細胞吞噬雞紅細胞的現象，并且可看到部分雞紅細胞聚集到吞噬細胞附近。

　　二 沉淀反應 雙向瓊脂擴散實(shí)驗

　　【原理】將可溶性抗原與相應抗體分別加入瓊脂板上的孔內，二者均可發(fā)生擴散，并且隨擴散距離的增大濃度降低，在抗原抗體比例適宜處形成可見(jiàn)的沉淀線(xiàn)。本實(shí)驗是定性實(shí)驗，常用于分析抗原抗體的純度關(guān)系以及相互關(guān)系。

　　【方法】

　�。�1）制板：將熔化的1%瓊脂加在載玻片上約5ml

　�。�2）打孔：待瓊脂凝固后，將載玻片置于打孔樣板上，用打孔器打孔

　�。�3）加樣：在中央孔內加抗體，上下兩孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl

　�。�4）結果觀(guān)察：將瓊脂板置于濕盒，37℃一天后觀(guān)察結果。

　　【結果】

　　在中央孔與添加抗原1的孔之間出現沉淀線(xiàn)，有抗原抗體反應，為陽(yáng)性反應，說(shuō)明抗原1與抗體相對應。中央孔與添加抗原2的孔之間沒(méi)有沉淀線(xiàn)，說(shuō)明抗原2與抗體之間不相對應。

　　【分析】抗體與抗原發(fā)生擴散時(shí)，隨擴散距離的增大濃度降低，在抗原抗體比例適宜處形成可見(jiàn)的沉淀線(xiàn)。當有沉淀線(xiàn)出現時(shí)，說(shuō)明有抗原抗體反應。

　　瓊脂鋪板時(shí)要一次鋪成，并且鋪設均勻。

　　打孔時(shí)要注意垂直打孔，注意不要有裂隙產(chǎn)生。

　　篇二：中性粒細胞吞噬功能試驗(小吞噬試驗)

　　中性粒細胞吞噬功能試驗（小吞噬試驗）

　　實(shí)驗目的

　　1.熟悉中性粒細胞的吞噬作用原理和方法。

　　實(shí)驗原理 血液中的中性粒細胞即小吞噬細胞，通過(guò)趨化、調理、吞入和殺菌等幾個(gè)步驟，能吞噬和消化衰老、死亡細胞及病原微生物等異物，是機體非特異性免疫的重要組成部分。 實(shí)驗材料

　　實(shí)驗方法

　　片。

　　瑞氏染色法：取瑞氏染液數滴滴于上述血片上先染1分鐘。然后加等量蒸餾水， 輕輕晃動(dòng)混勻，繼續染5分鐘，水洗，用吸水紙吸干后鏡檢。

　　結果觀(guān)察 油鏡檢查：尋找中性粒細胞，如果染色結果正確，可見(jiàn)細胞核及被吞噬的細菌染成紫色，而粒細胞的細胞漿則為淡紅色。 中性粒細胞吞噬試驗

　　計數：1.吞噬百分率：觀(guān)察100個(gè)中性粒細胞，計算其中吞噬有細菌的中性粒細胞數，計算出吞噬細胞百分率。 2.吞噬指數：觀(guān)察100個(gè)中性粒細胞，計算其中被吞噬的細菌總

　　篇三：吞噬細胞吞噬功能檢測實(shí)驗

　　-----吞噬細胞吞噬功能檢測實(shí)驗 實(shí)驗概要

　　本文介紹了吞噬細胞吞噬功能檢測（Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte）實(shí)驗的基本原理、操作步驟及注意事項等。

　　實(shí)驗原理

　　吞噬細胞具有對異物(細菌、綿羊紅細胞、雞紅細胞等)吞噬和消化的功能，在機體非特異性免疫中發(fā)揮重要作用。

　　小鼠腹腔內注射硫代乙醇酸鈉，可刺激巨噬細胞的聚集。四日后小鼠腹腔內注入羊紅細胞懸液，一小時(shí)后解剖收集腹腔吞嗜細胞，染色、鏡檢可觀(guān)察對羊紅細胞的吞嗜現象。通過(guò)計算吞嗜百分比或吞噬指數可測定吞噬細胞的吞嗜功能。

　　主要試劑

　　1. PBS 緩沖液

　　2. 3％硫代乙醇酸鈉

　　3. 1％羊紅細胞懸液

　　4. 瑞氏染液

　　5. 甲醇

　　主要設備

　　1. 解剖器材

　　2. 注射器

　　3. 尖吸管

　　4. 橡皮吸頭

　　5. 小試管

　　6. 載玻片

　　實(shí)驗材料

　　ICR 小鼠

　　實(shí)驗步驟

　　1. 實(shí)驗準備：用無(wú)菌注射器吸取3％硫代乙醇酸鈉3ml，注射于小鼠腹腔內。

　　2. 四日后，注射1％羊紅細胞懸液1ml 于小鼠腹腔內。

　　3. 注射1 小時(shí)后，將小鼠用頸椎脫臼法處死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用鑷子輕輕夾起腹膜，將腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml 預溫的PBS，同時(shí)用手反復揉搓腹腔約1—2 分鐘，以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細胞。

　　4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一潔凈試管內。

　　5. 用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產(chǎn)生氣泡)，吸取一滴滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。

　　6. 觀(guān)察結果，也可以將腹腔液涂片，平放于濕盤(pán)內，37℃，孵育30 分鐘。取出涂片，用預溫的PBS 沖洗3 次，然后用甲醇固定1 分鐘，以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混勻后，滴于涂片上染色5-10 分鐘，以蒸餾水沖洗（切勿先將染液傾去）后，待干，鏡檢。

　　7. 實(shí)驗結果

　　觀(guān)察小鼠腹腔巨噬細胞和中性粒細胞對羊紅細胞的吞噬現象，計算吞噬百分比，即每100 個(gè)吞噬細胞中吞噬有羊紅細胞的細胞數。也可用吞噬指數表示，即將100 個(gè)吞噬細胞中所吞噬羊紅細胞的總數除以100，即為吞噬指數。吞噬百分比和吞噬指數一般是平行的。

　　注意事項

　　1. 充分揉搓腹腔，盡可能將吞噬細胞沖洗下來(lái)。

　　2. 用尖吸管吸取腹腔液時(shí)，盡量避開(kāi)腹腔臟器，避免損傷血管引起出血，影響實(shí)驗結果。

　　3. 用瑞氏染液染色時(shí)，切勿先將染液傾去后再沖洗，以免染液中細小顆粒附著(zhù)于玻片上影響標本的清晰度。

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