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微生物實(shí)驗報告模板
學(xué)院：生命科學(xué)學(xué)院
專(zhuān)業(yè)：生物科學(xué)類(lèi)
年級：20xx級
姓名：
學(xué)號：1007040085
20xx年XX月XX日
實(shí)驗十分離產(chǎn)淀粉酶的微生物
一、實(shí)驗目的
1、熟悉常用微生物培養基（牛肉膏蛋白胨培養基）的配制方法。
2、學(xué)習各種無(wú)菌操作技術(shù)，并用此技術(shù)進(jìn)行為微生物稀釋分離、劃線(xiàn)分離接種。
3、用平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板發(fā)分離微生物。
4、認識為微生物存在的普遍性，體會(huì )無(wú)菌操作的重要性。
5、掌握分離產(chǎn)淀粉酶微生物的試驗方法和步驟，了解產(chǎn)淀粉酶的微生物種類(lèi)及形態(tài)。
二、實(shí)驗原理
土壤是微生物生活的大本營(yíng)，是尋找和發(fā)現有重要應用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類(lèi)微生物數量不同，一般土壤中細菌數量最多，其次為放線(xiàn)菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機質(zhì)豐富的土壤中放線(xiàn)苗數量較多；酵母菌在一般土壤中的數量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數量多些。本次實(shí)驗從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的微生物，應該取那些富含產(chǎn)淀粉酶的微生物的土樣。從復雜的微生物群體中獲得只含有一種或某一類(lèi)型微生物的過(guò)程稱(chēng)為微生物的分離與純化。常用的方法有
1、簡(jiǎn)單單細胞挑取法
2、平板分離法和稀釋涂布平板法
此次實(shí)驗采取的是平板分離法和稀釋涂布平板法結合，該方法操作簡(jiǎn)單，普遍用于微生物的分離與純化。其原理包括：
1)稀釋后的細胞懸液圖不在平板上可以分離得單個(gè)菌株
2)在適合于待分離微生物的生長(cháng)條件（如營(yíng)養、酸堿度、溫度與氧等）下培養微生物，或加入某種抑制劑造成只利于待分離微生物的生長(cháng)，而抑制其他微生物生長(cháng)的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。
3)微生物在固體培養基上生長(cháng)形成的單個(gè)菌落可以是由一個(gè)細胞繁殖而成的集合體。因此可通過(guò)挑取單菌落而獲得純培養。獲得單菌落的方法可通過(guò)稀釋涂布平板或平板劃線(xiàn)等方法完成。
以淀粉作為惟一碳源的培養基培養未分離細菌，能產(chǎn)淀粉酶的細菌能生長(cháng)，且菌落周?chē)霈F透明圈（淀粉不透明，被消化后變透明），則產(chǎn)淀粉酶微生物被分離出來(lái)。本實(shí)驗采用透明圈檢驗法檢測培養物中是否有產(chǎn)淀粉酶微生物的生長(cháng)。
三、實(shí)驗儀器及試劑
1、器材：
培養皿、載玻片、蓋玻片、普通光學(xué)顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培養箱、高壓蒸汽滅菌鍋、、天平、濾紙、pH試紙等。
2、試劑：
配制牛肉膏蛋白胨培養基的原料（牛肉膏、NaCl、瓊脂、蛋白胨）、淀粉、盧戈氏碘液、蒸餾水、250ml三角瓶中裝90ml無(wú)菌水加20粒玻璃珠，作稀釋用等。
3、土樣：
取自貴州大學(xué)農生樓后土壤10g，地下10cm左右。
四、實(shí)驗步驟：
1、配制牛肉膏蛋白胨培養基：
1）配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基400ml（用于11個(gè)平皿和7支試管斜面）牛肉膏0.5%…………………………………2g
蛋白胨1%……………………………………4g
NaCl0.5%…………………………………..2g
瓊脂2%……………………………………..8g
淀粉0.5%........................................2g
pH……………………………………7.0~7.2
�。�2）無(wú)菌水的制備
分別取9ml蒸餾水加入5支試管中，加塞后用報紙包扎捆綁，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌備用。取90ml蒸餾水加入250ml三角瓶中，同樣的操作，滅菌備用。
�。�3）器皿的準備
將刻度吸管用報紙包扎，培養皿裝入專(zhuān)用滅菌杯分別放入高溫滅菌箱滅菌備用。
2）倒11個(gè)平板和7支試管斜面，包扎，0.1Mp、121℃、滅菌30min.
2、制備土壤稀釋液：
稱(chēng)取土樣10g，放入盛有250ml無(wú)菌水的帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩搖勻10min使土和水充分混合，然后用移液槍從三角瓶中吸取1ml（此操作要求無(wú)菌操作），加入另一盛有9ml無(wú)菌水的試管中，混合均勻，以此類(lèi)推分別制成制成0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001不同稀釋度的土壤溶液。
3、涂布培養：
0.00001、0.000001濃度的土壤稀釋液作為涂布平板培養的對象，將其分別涂布在3個(gè)牛肉膏蛋白胨培養基中，共6個(gè)培養基，標號，37°C溫箱培養48h。
4、選取目的菌株：
兩天后對土壤溶液的微生物培養基進(jìn)行觀(guān)察，并取兩個(gè)菌落形態(tài)完全一致的分散的單個(gè)菌落，對其中一個(gè)噴灑盧戈氏碘液，觀(guān)察其菌落周?chē)欠癯霈F透明圈，如果出現透明圈說(shuō)明此菌株產(chǎn)淀粉酶，是目的菌株，記錄細菌明顯的性狀。
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