動(dòng)物實(shí)驗方案設計

動(dòng)物實(shí)驗方案設計

　　動(dòng)物實(shí)驗指在實(shí)驗室內，為了獲得有關(guān)生物學(xué)、醫學(xué)等方面的新知識或解決具體問(wèn)題而使用動(dòng)物 進(jìn)行的科學(xué)研究。以下小編為你整理了動(dòng)物實(shí)驗方案設計，希望對你有所參考幫助。

　　一、實(shí)驗設計的基本要素和原則

　　實(shí)驗設計就是擬定實(shí)驗方案，在進(jìn)行科學(xué)研究時(shí)，對研究方案作合理的安排，以減少隨機誤差的影響。采用適當的研究實(shí)驗次數，減少實(shí)驗的成本并能對數據進(jìn)行有效的分析，提高實(shí)驗研究的可靠性，從而實(shí)現研究的目的。

　　研究設計包括專(zhuān)業(yè)設計與統計設計兩個(gè)部分。統計設計主要是依據研究目的，從研究的現況條件出發(fā)，規定研究因素、選擇效應指標、確定研究對象的引入方式方法和規模，擬實(shí)施的方法、方案，及數據收集、整理分析的模式，直至結果的解釋?zhuān)�進(jìn)行系統的安排，使其消耗最少的人力物力和時(shí)間，而獲得可靠的信息與結論。

　　1．實(shí)驗設計的基本要素

　　實(shí)驗設計的基本要素為：實(shí)驗單位、處理因素和實(shí)驗效應。

　　(1)大多數情況下，實(shí)驗單位等同于實(shí)驗對象、受試對象，在動(dòng)物實(shí)驗中的動(dòng)物即為實(shí)驗單位。

　　(2)處理要素：是研究者根據研究目的施加于實(shí)驗單位，在實(shí)驗中需要觀(guān)察并闡明其效應的因素，是實(shí)驗單位分組的標志。而非處理因素則是指實(shí)驗中非人為施加的、與處理因素同時(shí)存在，同樣可以使受試對象產(chǎn)生實(shí)驗效應的因素，如實(shí)驗動(dòng)物的雌雄、體重等因素。突出研究因素的主導作用，排除混雜因素的干擾作用，可以通過(guò)相應的實(shí)驗設計方法，盡量使非處理因素在各處理組中的分布達到一致或均衡，以便分離出處理因素的效應。另外，處理因素的施加方法、強度、頻率和持續時(shí)間等，在整個(gè)實(shí)驗中應始終保持不變，以保證實(shí)驗結果評價(jià)的可靠性和穩定性；處理因素作用于受試對象的反應，是研究結果的最終體現，其基本要求客觀(guān)性、特異性、靈敏性和精確性。

　　(3)實(shí)驗效應：處理因素作用于實(shí)驗動(dòng)物后，出現實(shí)驗效應，一般是用各種指標來(lái)反映的。指標按其性質(zhì)可分為計數(含等級)指標和計量指標，計數指標如“是”“否”“有”“無(wú)”，“陽(yáng)性”“陰性”，“痊愈”“顯效”“好轉”“無(wú)效”，“存活”“死亡”等。計量指標指可測量(含間接測量)的指標，如很多檢查和檢驗指標。

　　在對指標進(jìn)行觀(guān)察時(shí)應注意：

　�、賹�(shí)驗效應的觀(guān)察應避免偏性。研究者的心理往往偏于陽(yáng)性結果，為了消除或減少測量偏差，設計時(shí)常采用盲法。

　�、趹�注意處理和效應的關(guān)系：處理與效應之間存在一定的關(guān)系，如劑量反應曲線(xiàn)。做實(shí)驗應選擇一個(gè)合適的實(shí)驗劑量。

　　2．實(shí)驗設計的基本原則

　　實(shí)驗設計的三大原則即為重復(replication)、隨機化(randomization)和對照(control)，這是藥理實(shí)驗設計的基本要求。其目的是排除非處理因素的作用，控制隨機誤差，避免系統誤差，提高實(shí)驗效率。

　　(1)重復原則(重復穩定性)：能夠充分重現的實(shí)驗，才能稱(chēng)為可靠的實(shí)驗。另外，實(shí)驗研究應有一定數量的重復觀(guān)測結果，即實(shí)驗單位要達到一定數量。避免將個(gè)別情況誤認為普遍情況，將偶然誤認為必然，將實(shí)驗結果錯誤推廣，同一實(shí)驗條件下、同一觀(guān)測指標的多次測量會(huì )有變異，多次測量才能描述變異，估計隨機誤差。實(shí)驗單位足夠多時(shí)，才能獲得隨機誤差比較小的統計量。重復的目的是估計和控制實(shí)驗中的隨機誤差，提高實(shí)驗結果的可靠性。樣本中包含的實(shí)驗單位數稱(chēng)為樣本含量(樣本量)。重復原則的應用就是樣本含量的估計。

　　首先要考慮實(shí)驗要有足夠的例數，能準確重復再現，同時(shí)盡可能排除對實(shí)驗的干擾，它包括：①動(dòng)物方面，如品種、品系、體重、年齡、性別、飼料及飼養環(huán)境等；②儀器方面：準確性、穩定性、電壓穩定性及操作熟練程度等；③藥物方面：性能、批號、純度、劑量和注射速度等。此外還有室溫、氣壓、季節等物理因素，甚至實(shí)驗是在上午還是下午，動(dòng)物群養或單養等，均應預先考慮清楚，做好設計。

　　(2)隨機化原則：其目的是一切干擾因素分配到各組時(shí)只受純機遇的抽樣誤差的影響，避免受實(shí)驗者主觀(guān)因素的干擾，減小或避免偏性誤差，是實(shí)驗設計中的重要原則之一。隨機化手段可采取隨機數字表或小計算機上的隨機數字鍵。

　　在實(shí)驗分組時(shí)，每個(gè)受試對象均有相同的概率或機會(huì )被分配到實(shí)驗組和對照組。隨機化是一種實(shí)驗設計的分組程序，而非“隨便”、“隨意”和“非選擇性”。隨機化的意義是保證各種非處理因素在各個(gè)實(shí)驗組和對照組達到均衡，從而顯現處理因素的作用，避免各種主、客觀(guān)因素可能導致的偏性，減少系統誤差，提高研究結果的效度。隨機化分組是從假設檢驗結果推論因果關(guān)系的基礎，確定處理因素與實(shí)驗結果之間因果關(guān)系的前提是隨機分組后、施加干預前，所有觀(guān)察對象都屬于同一個(gè)總體。

　　(3)對照原則：確定實(shí)驗組時(shí)，同時(shí)設立對照組，即不施加處理因素的實(shí)驗組，只暴露于非處理因素。對照組除沒(méi)有處理因素外，其他對實(shí)驗結果可能有影響的因素(已知、可控的非處理因素)都應該與實(shí)驗組盡量相同。

　　常用的對照形式，分為空白對照(blank control)、實(shí)驗對照(experimental control)、標準對照(standard control)、相互對照(mutual control)、潛在對照(potential control)�？瞻讓φ占磳�對照組不施加干預，對照組的處理因素為“空白”；實(shí)驗對照即對照組不施加干預，但施加某種與處理因素有關(guān)的實(shí)驗因素，用于處理因素的施加需伴隨其他因素，而這些因素又可能影響實(shí)驗結果時(shí)；標準對照組的干預采用現有“標準”方法或常規方法，主要用于臨床試驗，當倫理上不允許對對照組患者采用空白對照或假干預，如新藥研究采用目前療效確定的藥物作為對照藥；相互對照則不專(zhuān)門(mén)設立對照組，各實(shí)驗組間互為對照，如比較幾種同類(lèi)藥物的療效差別：潛在對照也不用專(zhuān)門(mén)設立對照組，以過(guò)去的研究結果為對照(歷史對照)。另外，當實(shí)驗組和對照組例數相等時(shí)，統計學(xué)證明其統計效率最高，輕視對照或對照較少是錯誤的和不妥當的。

　　二、抽樣和分組

　　抽樣和分組必須嚴格遵守隨機原則，主要因素要均衡一致，但抽取哪一只動(dòng)物。分配到哪一組則按隨機數字表或鍵而定。如果隨意拿取動(dòng)物，先取到的為第一組，依次遞推，則反應活潑敏捷不易抓到的動(dòng)物勢必集中到最后幾組，各組的條件就有了偏性誤差。為此，下面介紹幾種主要的分組實(shí)驗設計方法。

　　1．完全隨機設計

　　完全隨機設計(completely random design)亦稱(chēng)單因素設計，即將受試對象隨機分到各處理組中進(jìn)行試驗觀(guān)察，或分別從不同總體中隨機抽樣進(jìn)行對比觀(guān)察。它適用于兩個(gè)或兩個(gè)以上樣本的比較，各組間樣本量可相等，也可不相等，但是樣本相等時(shí)統計分析效率較高。

　　例1．將12只動(dòng)物隨機分配到A、B兩組。

　　(1)先將12只動(dòng)物編號為1、2……12號，然后在隨機數字表內任意確定一個(gè)起始點(diǎn)和方向連續取12個(gè)隨機數字，并依次抄錄于動(dòng)物編號下。

　　(2)本例從隨機數字表第6行第19、20列起向下讀取12個(gè)隨機數字，取兩位隨機數字(表4-1)。

　　(3)將隨機數字從小到大順序排列后得序號R，并規定R=1～6者為A組，R：7～12者為B組。

　　表4-1  12只動(dòng)物完全隨機分兩組結果（采用隨機數字表）

　　例2．將15只動(dòng)物隨機分成三組。

　　(1)將動(dòng)物編號如1、2……15號，然后在隨機數字表內從某行某列起向某方向讀取15個(gè)隨機數字，取兩位隨機數字，依次抄錄于動(dòng)物編號下。

　　(2)將隨機數字從小到大順序排列后得序號R。

　　(3)規定R=1～5者為A組，R=6～10者為B組，R=11～15者為C組。

　　(4)本例從隨機數字表第5行第17、18列起向下讀取15個(gè)隨機數字(表4-2)。

　　表4-2  15只動(dòng)物完全隨機分三組結果

　　注：隨機數字06之后隨機數字為02，但前面已經(jīng)出現過(guò)，故舍去。

　　隨機分組應注意：

　　(1)隨機數的位數不應小于N的位數：

　　(2)隨機數如果有重號數字應舍棄：

　　(3)若科研上需要各組例數不等可利用序號(R)調整各組例數。如在例2中要求A組6例，B組5例，C組4例，可規定R=1～6者為A組，R=7～11者為B組，R＝12～15者為C組。

　　統計假設檢驗方法：

　　(1)計量資料：t檢驗、方差分析或秩和檢驗等；

　　(2)計數資料：卡方檢驗等。

　　完全隨機設計的優(yōu)缺點(diǎn)：設計及統計分析簡(jiǎn)單。但是，實(shí)驗效率不高，只能分析單因素。

　　2．配對實(shí)驗設計

　　將受試對象按某些特征或條件配成對子，然后分別把每對中的兩個(gè)受試對象隨機分配到實(shí)驗組和對照組，再給予每對中的個(gè)體以不同處理，連續實(shí)驗若干對，觀(guān)察對子間的差別有無(wú)意義。

　　配對設計的特征或條件：

　　動(dòng)物實(shí)驗常以種屬、品系、性別相同，年齡、體重相近的兩只動(dòng)物配成對子；臨床療效觀(guān)察常將病種、病型、族別、性別相同，年齡相差不超過(guò)2～3歲，生活習慣、工作環(huán)境等相似的患者配成對子；進(jìn)行配對設計時(shí)應注意不要“配對過(guò)頭”。例如，研究高血壓與鈉鹽攝入量的關(guān)系，如果將高血壓患者與非高血壓患者按飲食習慣配對后比較鈉鹽攝入量，由于飲食習慣與鈉鹽攝入量關(guān)系密切，可能會(huì )掩蓋病例與對照在鈉鹽攝入量上的差異；實(shí)驗者必須在整個(gè)研究過(guò)程中，始終能辨認屬于同一對子的是哪兩只動(dòng)物，因此動(dòng)物編號是非常重要的；記錄實(shí)驗數據應保持每對的一一對應關(guān)系，不能錯亂或缺失。計算每對實(shí)驗數據的差值時(shí)，順序應當一致。

　　例：取20只小鼠，按性別、體重、窩別配成10對，試將其分配到實(shí)驗組與對照組中去。

　　先按配對條件配對，并將對子編號，如1.1、1.2、2.1、2.2……10.1、10.2，然后再在隨機數字表上任意指定行列及查找方向，將隨機數字依次抄寫(xiě)在“對子號”下。

　　事先規定，遇單數定為AB順序，遇雙數定為BA順序。

　　本例：從隨機數字表中第46行31、32列向右查找隨機數字(表4～3)

　　表4-3  20只動(dòng)物完全隨機分三組結果

　　常用統計假設檢驗方法

　　計量資料：配對t檢驗、配對符號檢驗、wilcoxon符號秩檢驗。

　　計數資料：卡方檢驗、一致性檢驗等。

　　配對實(shí)驗設計的優(yōu)點(diǎn)：配對設計可做到嚴格控制非處理因素對實(shí)驗結果的影響，同時(shí)使受試對象間的均衡性增大，因而可提高實(shí)驗效率。它與成組的完全隨機設計相比較，可克服受試對象間由于遺傳因素的差異所引起的偏差，同時(shí)還可以減少樣本含量。

　　3．交叉實(shí)驗設計(以藥理實(shí)驗為例)

　　是在自身配對設計基礎上發(fā)展的雙因素設計，可在同一對象身上觀(guān)察兩種處理的效應，并能減少誤差，提高檢驗效率。

　　例如：研究A藥治療高血壓的療效，以傳統的抗高血壓B藥物作對照。經(jīng)隨機化將實(shí)驗動(dòng)物分為兩組，一組先給A藥后再給B藥，另一組先給B藥后再給A藥。第一、二階段均為一個(gè)月，一、二階段之間的間歇期為一周。結果見(jiàn)表4-4：

　　表4-4  兩種藥物治療高血壓的交叉實(shí)驗

　　4．析因實(shí)驗設計(factorial design)

　　析因設計是一種多因素多水平交叉分組進(jìn)行全面實(shí)驗的設計方法，將兩個(gè)或多個(gè)實(shí)驗因素的各水平進(jìn)行實(shí)驗。

　　例如：2個(gè)因素同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗，每個(gè)因素取2個(gè)水平，實(shí)驗的總組合數有22=4個(gè)(表4-5)；如果每個(gè)因素取3個(gè)水平，則總組合數有32=9個(gè)，即這9種組合都要進(jìn)行實(shí)驗，故一般采用簡(jiǎn)單的析因實(shí)驗設計。

　　析因設計可以提供三方面的重要信息：各因素不同水平的效應大��；各因素間的

　　表4-5 2×2析因設計

　　交互作用；通過(guò)比較各種組合，找出最佳組合。如果在一次實(shí)驗中，當一個(gè)因素的水平間的效應隨其他因素的水平不同而變化時(shí)，因素間存在交互作用，它是各因素效應間不獨立的表現。

　　5．正交實(shí)驗設計

　　正交設計適用于多因素分析，可算出各因素不同水平對實(shí)驗的影響，找出最佳組合�，F以L(fǎng)4(23)及L9(34)正交設計結合例子簡(jiǎn)單介紹(L表示正交設計，4或9表示分4組或9組，23表示3個(gè)因素2個(gè)水平，34表示4個(gè)因素3個(gè)水平)。

　　例1  營(yíng)養液中有三個(gè)因素(Ca2+，K+，Mg2+)，各有2個(gè)水平(高濃度、低濃度)，要分析它們對實(shí)驗的影響，找出最佳組合，可設計如下表4-6：

　　表4-6 L4(23)正交設計

　　表中Ca2+的1水平之和為8.6+6.2=14.8，K+的1水平之和為8.6+9.7=18.3…�？梢钥闯�，Ca2+的差值絕對值最大，說(shuō)明Ca2+對實(shí)驗影響最大，且低濃度好。K+的影響次之，高濃度好。Mg2+的影響最小，高濃度好。結論是以低Ca2+，高K+，高M(jìn)g2+為最佳組合。但是，這一組合在實(shí)驗中并未出現，但正交設計提示這是最佳組合，可安排復試加以驗證。

　　例2  四種藥物各有三個(gè)水平，用L9(34)正交設計，見(jiàn)表4-7：

　　由表中可以看出甲藥影響最大，應列為主藥，大劑量較好。乙、丙、丁三藥影響較小，可列為輔藥，最佳組合為甲藥大劑量，乙藥大劑量，丙藥小劑量，不用丁藥。按理四種藥物各三個(gè)水平，應做34=81組實(shí)驗，現在只做9組就找出了實(shí)驗中并未出現的最佳組合。

　　三、預試驗及篩選

　　1．預試驗

　　在正式實(shí)驗前應充分重視預試驗的重要性，小規模的預試驗是使用少量的動(dòng)物得到預示性的數據或通過(guò)預試驗將操作和技術(shù)固定并完善，即通過(guò)預試驗可了解各因素對實(shí)驗的影響，找出最適實(shí)驗對象、用藥劑量和實(shí)驗條件及檢測指標，如溫度、刺激強度、營(yíng)養液組方等，為正式實(shí)驗做必要的準備，提高實(shí)驗的重復穩定性和靈敏度。為此，預試驗中應注意以下問(wèn)題：

　　表4-7  L9(34)正交設計

　　(1)實(shí)驗穩定性：變異系數越小，說(shuō)明實(shí)驗波動(dòng)越小，實(shí)驗的重復穩定性越好。變異系數CV=。

　　(2)實(shí)驗靈敏度：預試驗時(shí)測定兩個(gè)有效量(D1、D2)，測定其反應強度(E1、E2)。

　　計算因變系數，因變系數越小，實(shí)驗靈敏度越好。因變系數CI=(E2-E1)／(lgD2-lgD1)。

　　2．篩選

　　篩選是在預試驗或既往經(jīng)驗的基礎上，用少量動(dòng)物對多種藥物或造模手段進(jìn)行實(shí)驗。一般以P<0.1作為篩選合格的標準，以免漏篩有價(jià)值的藥物。常見(jiàn)篩選實(shí)驗有以下幾種。

　　(1)保護性實(shí)驗(以急性毒性實(shí)驗為例)：篩選解毒藥時(shí)，常將各解毒藥與毒劑的半數致死量(LD50)合用，連用4只非純品系動(dòng)物，如無(wú)死亡，表明該藥篩選合格(P<0.1)；如有一只動(dòng)物死亡時(shí)，可增加3只動(dòng)物再試，如3只不死，也為篩選合格�？傊�，當死亡率為0／4、1／7、2／9、3／12、4／14時(shí)均可認為篩選合格。當然，篩選合格表示值得進(jìn)行正式實(shí)驗，不一定正式實(shí)驗必定有良好結果。

　　(2)概率判別實(shí)驗：本法應用范圍更廣，對幾只動(dòng)物用藥檢測其陽(yáng)性反應數，就可根據概率論推算出該藥陽(yáng)性率的大致情況，參見(jiàn)表4-8。

　　表4-8  概率判別實(shí)驗（P<0.1）

　　一、LD50值測定

　　1．要求和注意事項

　　(1)動(dòng)物：多用非純品系動(dòng)物(能反應個(gè)體差異)，如小鼠，健康雌雄各半，20±2g為宜，日齡達到性成熟。

　　(2)實(shí)驗條件：在有控制的室溫、光照、飼養和衛生條件下進(jìn)行。

　　(3)藥物及給藥途徑：以靜脈注射、腹腔注射和灌胃為主，最好和臨床上給藥途徑相同。小鼠的用藥量標準為：灌胃給藥應小于1ml；靜脈注射應小于0.2ml；腹腔注射應小于1ml。另外，藥液pH值及滲透壓應在生理范圍內。

　　(4)觀(guān)察項目和時(shí)間：記錄毒性反應的癥狀、原因以及致死時(shí)間、致死藥量、致死動(dòng)物數量等，當發(fā)現組織病變時(shí)，應取材做病理切片，必要時(shí)做組織學(xué)檢查，整個(gè)實(shí)驗觀(guān)察7d。

　　(5)實(shí)驗報告：必須說(shuō)明實(shí)驗條件，制定LD50值為全面表達實(shí)驗結果，應求出

　　95％可信區間和LD10來(lái)表示誤差限度和量效關(guān)系，通過(guò)LD50和LD10算出LD5、LD95以

　　及回歸系數。

　　(6)LD50測定法：方法很多，有加權機率單位法(Bliss法)、目測機率單位法、目測圖解法、寇氏法(Korlbor)等，對短期內致死藥物還可采用序貫法。

　　(7)對于中毒表現和致死原因的分析應給予充分重視。

　　2．LD50值測定步驟

　　(1)預試驗：根據經(jīng)驗或文獻找出實(shí)驗動(dòng)物0和100％死亡的劑量，即上下限劑量(Dn、Dm)。對于無(wú)毒性參考資料的藥物，一般先配制最大濃度藥劑，然后倍比稀釋成多個(gè)劑量，方法是每組取4只小鼠，按估計劑量梯度依次給藥。如某組死亡數為4／4，其前一組為2／4或3／4則以該組劑量定為Dm，如前一組是0／4或1／4，則以該組劑量的1.5倍定為Dm，同法找出Dn，這樣找出的Dm，Dn比較可靠，為正式實(shí)驗提供依據。

　　(2)分組：以4～9組為宜，各組給藥劑量按等比關(guān)系排列。

　　(3)根據實(shí)驗結果計算LD50：

　　LD50的95％平均可信限LD50±1.4×(LD84一LD16)／

　　其中N' 為5％～95％致死率間動(dòng)物數。

　　二、慢性毒性實(shí)驗

　　1．動(dòng)物選擇

　　至少采用兩種不同種屬的實(shí)驗動(dòng)物，即嚙齒類(lèi)動(dòng)物(大鼠、小鼠等)和哺乳類(lèi)動(dòng)物(犬、猴等)。一般常采用大鼠和犬兩種，雌雄各半，且動(dòng)物數量不宜太少，要滿(mǎn)足統計學(xué)處理的要求。動(dòng)物的進(jìn)化程度越高，對藥物的敏感性越強，慢性毒性實(shí)驗的周期較長(cháng)，所以要盡量選用年齡較小的實(shí)驗動(dòng)物，而且選用未成年的實(shí)驗動(dòng)物在迅速生長(cháng)時(shí)期，可以發(fā)現藥物對生長(cháng)及各組織器官成熟的影響。

　　慢性毒性實(shí)驗開(kāi)始選擇的小鼠年齡最好是2～3周，體重8～10g，而大鼠不超過(guò)3周，體重50～60g。但是避孕藥物的毒性實(shí)驗則要求必須使用性成熟動(dòng)物，如小鼠應60日齡以上，大鼠應在120日齡以上。

　　2．劑量選擇

　　常用三個(gè)劑量組，大動(dòng)物可用兩個(gè)劑量組，并嚴格按要求設動(dòng)物對照組。高劑量組(LD50的1／10～1／4劑量)應有輕微可見(jiàn)的毒性反應(或者某些化驗指標有明確而輕微的變化)。中劑量組按LD50的1／30～1／10定量，最低劑量組應是閾劑量組或是無(wú)作用劑量組，具體劑量依據實(shí)驗目的而定。

　　3．給藥途徑

　　最好選擇臨床試用的給藥途徑。

　　4．給藥期限

　　最好是臨床試用的用藥時(shí)間(連續給藥)的3～4倍，臨床用藥30d以上者，動(dòng)物給藥至少半年。

　　5．觀(guān)察指標

　　包括體征、常規血、尿檢查、臟器解剖及肉眼觀(guān)察、生化指標檢查等(如新藥則按其國家規定標準核查應有項目)。做病理切片進(jìn)行組織學(xué)檢查(二十幾個(gè)臟器)，必要時(shí)行骨髓檢查、酸堿平衡、水和電解質(zhì)代謝等。

　　由于在慢性毒性實(shí)驗中，受試藥物的給藥劑量較低，往往一些觀(guān)察指標變化程度較小，因此需注意：在給藥前要觀(guān)察并記錄預計的觀(guān)察指標，以利于給藥后的比較；在給藥期間進(jìn)行定期指標觀(guān)察時(shí)，對照組需同步觀(guān)察；實(shí)驗結束后，主張將最高劑量組與對照組各留部分動(dòng)物繼續飼養1～2個(gè)月，以便對已出現變化的指標進(jìn)行追蹤觀(guān)察，有助于探討受試藥物對實(shí)驗動(dòng)物有無(wú)后續作用，以及損傷可否恢復。

　　6．結果定論

　　按觀(guān)察記錄的結果定論，但不應忽視綜合因素及其他因素對結果的影響。

　　三、致癌實(shí)驗

　　1．動(dòng)物選擇

　　其選擇動(dòng)物最重要的依據是對誘發(fā)腫瘤的易感性，所以應考慮物種、品系、年齡和性別。物種的選擇對受試物有特定的靶器官時(shí)尤為重要。同時(shí)還應考慮選擇腫瘤自發(fā)率低、抗病力強且易管理的實(shí)驗動(dòng)物，一般多選用大、小鼠，雌雄各半，100只以上做一組，動(dòng)物多為近交系的第一代雜交動(dòng)物。

　　2．劑量選擇

　　此點(diǎn)較難，但非常重要，一般使用三個(gè)劑量，其中最高劑量應為最大耐受量，理想的最大耐受量不應致死，也不引起可能縮短壽命的毒性表現和病理改變，并且與對照組相比的體重下降不大于10％，中劑量為高劑量的1／4～1／3，低劑量最好相當于或低于人類(lèi)實(shí)際可能接觸的劑量，同時(shí)應設計好陰性對照組和陽(yáng)性對照組。

　　3．觀(guān)察指標

　　體征，一般癥狀，定期稱(chēng)體重，最主要是密切觀(guān)察有無(wú)腫瘤發(fā)生，如生長(cháng)有腫瘤，則需要做病理組織切片或電鏡觀(guān)察其病理學(xué)變化。

　　4．結果定論

　　一般以組織學(xué)結果判定。

　　四、其他簡(jiǎn)單實(shí)驗

　　1．局部刺激性實(shí)驗

　　(1)動(dòng)物選擇：最好選用與人類(lèi)皮膚、黏膜反應比較相近的動(dòng)物，如家兔、豚鼠和小型豬等。動(dòng)物種屬依據要觀(guān)察的指標和模型的合理性進(jìn)行選擇，通常一個(gè)實(shí)驗類(lèi)型選擇一種實(shí)驗動(dòng)物進(jìn)行評價(jià)。刺激性實(shí)驗結果從動(dòng)物外推到人的可靠性有限，如果用兩種動(dòng)物進(jìn)行試驗得到類(lèi)似的結果，則會(huì )增加從動(dòng)物外推到人的可靠性。

　　(2)劑量選擇：可選擇幾種不同濃度的制劑進(jìn)行實(shí)驗，其中包括擬用于臨床研究的濃度，為臨床研究的安全性提供選擇依據�？梢酝ㄟ^(guò)改變給藥頻次進(jìn)行劑量的調整。對于局部用膏狀制劑，在給藥面積不變的情況下，不應通過(guò)增加厚度來(lái)滿(mǎn)足增加給藥劑量的目的。

　　(3)給藥途徑：一般應與臨床給藥途徑一致，否則應加以說(shuō)明。

　　(4)給藥部位：一般應選擇與臨床應用相似的部位。并注意對可能接觸到受試物的周?chē)�組織的影響。設計劑量和給藥頻次時(shí)，應考慮受試動(dòng)物給藥部位的解剖和生理特點(diǎn)，保證受試物在給藥部位的有效暴露時(shí)間。

　　(5)觀(guān)察指標：首先要進(jìn)行肉眼觀(guān)察，詳細描述動(dòng)物局部反應，包括紅斑、水腫、充血程度及范圍，并以計分的方式表示，同時(shí)觀(guān)察動(dòng)物的一般狀態(tài)、行為、體征等；其次進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，應詳細描述給藥部位的病理變化，并進(jìn)行半定量分析、判斷，提供相應的組織病理學(xué)照片；最后進(jìn)行可逆性觀(guān)察，若出現刺激性反應，應進(jìn)行停藥后的恢復期觀(guān)察，以明確毒性反應的恢復情況。

　　2．過(guò)敏性實(shí)驗

　　通常選用體重300～400g的豚鼠，并需要仔細觀(guān)察過(guò)敏反應的一系列指標。

　　3．異常毒性實(shí)驗

　　最好選用同一品種小鼠(純品系)，體重17～20g，雌性無(wú)孕，健康無(wú)傷。

　　4．熱原檢查

　　目前常選用家兔為本實(shí)驗動(dòng)物。在熱原實(shí)驗開(kāi)始之前進(jìn)行家兔的體溫監測，只有在監測的4h內，家兔的體溫差異不超過(guò)0.4℃的即可被用來(lái)進(jìn)行熱原實(shí)驗，而且在給約之前的30min內體溫差不超過(guò)0.2℃的家兔方可給藥。其給藥途徑為耳緣靜脈注射。在給藥后4h內需要密切監測實(shí)驗用家兔的體溫變化。

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