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實(shí)驗微生物接種技術(shù)講解
微生物包括：細菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、顯微藻類(lèi)等在內的一大類(lèi)生物群體，它個(gè)體微小，與人類(lèi)關(guān)系密切。以下是小編為大家整理的實(shí)驗微生物接種技術(shù)講解，僅供參考，希望能夠幫助大家。
實(shí)驗微生物接種技術(shù)講解1
一、目的：
學(xué)習微生物工作的基本接種方法，建立純培養技術(shù)中的“無(wú)菌”概念，掌握無(wú)菌操作技術(shù)。
二、原理：
所謂接種就是將一定量的純種微生物在無(wú)菌操作條件下轉移到另一已滅菌，并適宜于該菌生長(cháng)繁殖所需的培養基上的過(guò)程。本實(shí)驗要求嚴格進(jìn)行無(wú)菌操作，一般是在無(wú)菌操作臺或在實(shí)驗室內火焰旁進(jìn)行。根據不同的實(shí)驗目的和培養方式，可以采用不同的接種工具和接種方法。
三、實(shí)驗材料：
斜面培養基、液體培養基、平板培養基、記號筆、酒精燈、接種針、消毒酒精、涂布棒等。
四、操作步驟
�。ㄒ唬o(wú)菌操作
菌種分離或移接工作應在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行，接種室、接種箱或超凈工作臺是常用的'接種環(huán)境。用前先清潔好衛生，再進(jìn)行消毒處理�？捎米贤饩�(xiàn)燈和甲醛熏蒸的雙重作用，或用3%來(lái)蘇爾及其他表面消毒進(jìn)行噴霧。
操作者的手應先用肥皂洗凈，再用酒精棉球消毒；整個(gè)操作過(guò)程都要靠近酒精燈火焰；接種工具在用前和用后必須在燈焰上滅菌；棉塞不得亂放，操作中只能夾在手上；不能有跑、跳等力度大的動(dòng)作，以免引起空氣大振動(dòng)而增加染菌機會(huì )。
�。ǘ┙臃N方法
�。�1）斜面接種：
從已長(cháng)好微生物的菌種管移接到另一斜面管的方法。此法用于好氣性微生物的接種。
左手持菌種管和斜面管，使斜面向上，并盡量放平。用右手先將棉塞擰轉松動(dòng)，再拿接種環(huán)，用右手的小指、無(wú)名指和手掌撥下棉塞并夾緊，同時(shí)將管口在火焰上燃燒一圈，接種環(huán)灼燒滅菌后插入管內，冷卻、挑菌，立即轉入斜面管底部，沿斜面劃曲線(xiàn)或直線(xiàn)。
圖1.斜面接種示意圖
�。�2）液體接種：
由斜面菌接種到液體培養基（如試管或三角瓶等）中的方法。
操作與上法基本一致，只是在將接種環(huán)送入液體培養基中時(shí)使環(huán)在液體與管壁接觸的地方輕輕磨擦，使菌體分散，然后塞上棉塞，再輕輕搖動(dòng)均勻，即可培養。如果菌種是培養在液體培養基中時(shí)，一般用移液管或滴管接種。
�。�3）穿刺接種：
用接種針挑取菌種后，插入深層固體培養基內，（不要刺到底部），再沿原路拔出，此法用于厭氣性細菌接種、檢查細菌的運動(dòng)能力。
�。�4）平板接種：
將菌種接至培養皿的方法，平板接種的目的是觀(guān)察菌落形態(tài)、分離純化菌種，活菌計數以及在平板上進(jìn)行各種試驗時(shí)采用的一種接種方法，可分為下面幾種：
1)斜面接平板
a.劃線(xiàn)法：見(jiàn)平板劃線(xiàn)分離法。
b.點(diǎn)種法：一般用于觀(guān)察霉菌和酵母細胞，輕輕點(diǎn)在平板的表面（根霉點(diǎn)一點(diǎn)，曲霉、酵母可點(diǎn)3-4點(diǎn)）即可。
2)平板接斜面：一般是將經(jīng)平板分散培養得到的單菌落接種到斜面，以便作鑒定或擴大培養、保存之用。
五、思考題
1．何謂無(wú)菌操作？接種前應作哪些準備工作？
2．總結幾種接種方法的要點(diǎn)及應注意的事項？
實(shí)驗微生物接種技術(shù)講解2
實(shí)驗目的：學(xué)習掌握無(wú)菌操作技術(shù)；學(xué)習接種方法；學(xué)習常用的分離、純化菌種的方法。實(shí)驗內容：
一、接種
將微生物接到適于它生長(cháng)繁殖的人工培養基上或活的生物體內的過(guò)程叫做接種。
�。�、接種工具和方法
在實(shí)驗室或工廠(chǎng)實(shí)踐中，用得最多的接種工具是接種環(huán)、接種針。由于接種要求或方法的不同，接種針的針尖部常做成不同的形狀，有刀形、耙形等之分。有時(shí)滴管、吸管也可作為接種工具進(jìn)行液體接種。在固體培養基表面要將菌液均勻涂布時(shí)，需要用到涂布棒。（圖３－３）
1．接種針2.接種環(huán)3.接種鉤4.5.玻璃涂棒6.接種圈7.接種鋤8.小解剖刀
常用的接種方法有以下幾種：
�。保﹦澗�(xiàn)接種這是最常用的接種方法。即在固體培養基表面作來(lái)回直線(xiàn)形的移動(dòng)，就可達到接種的作用。常用的接種工具有接種環(huán)，接種針等。在斜面接種和平板劃線(xiàn)中就常用此法。
�。玻┤c(diǎn)接種在研究霉菌形態(tài)時(shí)常用此法。此法即把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點(diǎn)，讓它各自獨立形成菌落后，來(lái)觀(guān)察、研究它們的形態(tài)。除三點(diǎn)外，也有一點(diǎn)或多點(diǎn)進(jìn)行接種的。
�。常┐┐探臃N在保藏厭氧菌種或研究微生物的動(dòng)力時(shí)常采用此法。做穿刺接種時(shí)，用的接種工具是接種針。用的培養基一般是半固體培養基。它的做法是：用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養基中心向管底作直線(xiàn)穿刺，如某細菌具有鞭毛而能運動(dòng)，則在穿刺線(xiàn)周?chē)軌蛏L(cháng)。
�。矗不旖臃N該法是將待接的微生物先放入培養皿中，然后再倒入冷卻至45°
C左右的固體培養基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就達到稀釋的目的。待平板凝固之后，置合適溫度下培養，就可長(cháng)出單個(gè)的微生物菌落。
�。担┩坎冀臃N與澆混接種略有不同，就是先倒好平板，讓其凝固，然后再將菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作來(lái)回左右的涂布，讓菌液均勻分布，就可長(cháng)出單個(gè)的微生物的菌落。
�。叮┮后w接種從固體培養基中將菌洗下，倒入液體培養基中，或者從液體培養物中，用移液管將菌液接至液體培養基中，或從液體培養物中將菌液移至固體培養基中，都可稱(chēng)為液體接種。
�。罚┳⑸浣臃N該法是用注射的方法將待接的微生物轉接至活的生物體內，如人或其它動(dòng)物中，常見(jiàn)的疫苗預防接種，就是用注射接種，接入人體，來(lái)預防某些疾病。
�。福┗铙w接種活體接種是專(zhuān)門(mén)用于培養病毒或其它病原微生物的一種方法，因為病毒必須接種于活的生物體內才能生長(cháng)繁殖。所用的活體可以是整個(gè)動(dòng)物；也可以是某個(gè)離體活組織，例如猴腎等；也可以是發(fā)育的雞胚。接種的方式是注射，也可以是拌料喂養。
�。�、無(wú)菌操作
培養基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過(guò)滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無(wú)菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養基上，這個(gè)過(guò)程叫做無(wú)菌接種操作。在實(shí)驗室檢驗中的各種接種必須是無(wú)菌操作。
實(shí)驗臺面不論是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒劑擦洗；水平是倒瓊脂培養基時(shí)利于培養皿內平板的厚度保持一致。在實(shí)驗臺上方，空氣流動(dòng)應緩慢，雜菌應盡量減少，其周?chē)s菌也應越少越好。為此，必須清掃室內，關(guān)閉實(shí)驗室的門(mén)窗，并用消毒劑進(jìn)行空氣消毒處理，盡可能地減少雜菌的數量。
空氣中的雜菌在氣流小的情況下，隨著(zhù)灰塵落下，所以接種時(shí)，打開(kāi)培養皿的時(shí)間應盡量短。用于接種的器具必須經(jīng)干熱或火焰等滅菌。接種環(huán)的火焰滅菌方法：通常接種環(huán)在火焰上充分燒紅（接種柄，一邊轉動(dòng)一邊慢慢地來(lái)回通過(guò)火焰三次），冷卻，先接觸一下培養基，待接種環(huán)冷卻到室溫后，方可用它來(lái)挑取含菌材料或菌體，迅速地接種到新的培養基上。（圖３－４）然后，將接種環(huán)從柄部至環(huán)端逐漸通過(guò)火焰滅菌，復原。不要直接燒環(huán)，以免殘留在接種環(huán)上的菌體爆濺而污染空間。平板接種時(shí)，通常把平板的面傾斜，把培養皿的蓋打開(kāi)一小部分進(jìn)行接種。在向培養皿內倒培養基或接種時(shí)，試管口或瓶壁外面不要接觸底皿邊，試管或瓶口應傾斜一下在火焰上通過(guò)。
二、分離純化
含有一種以上的微生物培養物稱(chēng)為混和培養物（Mixedculture）。如果在一個(gè)菌落中所有細胞均來(lái)自于一個(gè)親代細胞，那么這個(gè)菌落稱(chēng)為純培養（Pureculture）。在進(jìn)行菌種鑒定時(shí)，所用的微生物一般均要求為純的培養物。得到純培養的過(guò)程稱(chēng)為分離純化，方法有許多種。
�。�、傾注平板法
首先把微生物懸液通過(guò)一系列稀釋?zhuān)∫欢康南♂屢号c熔化好的保持在40~50°左右的營(yíng)養瓊脂培養基充分混合，然后把這混合液傾注到無(wú)菌的培養皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養。單一細胞經(jīng)過(guò)多次增殖后形成一個(gè)菌落，取單個(gè)菌落制成懸液，重復上述步驟數次，便可得到純培養物。（圖３－５，a）
首先把微生物懸液通過(guò)適當的稀釋?zhuān)∫欢康南♂屢悍旁跓o(wú)菌的已經(jīng)凝固的營(yíng)養瓊脂平板上，然后用無(wú)菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養基表面上，經(jīng)恒溫培養便可以得到單個(gè)菌落。（圖３－５，b）３、平板劃線(xiàn)法
最簡(jiǎn)單的分離微生物的方法是平板劃線(xiàn)法。用無(wú)菌的接種環(huán)取培養物少許在平板上進(jìn)行劃線(xiàn)。劃線(xiàn)的方法很多，常見(jiàn)的比較容易出現單個(gè)菌落的劃線(xiàn)方法有斜線(xiàn)法、曲線(xiàn)法、方格法、放射法、四格法等。（圖３－６）當接種環(huán)在培養基表面上往后移動(dòng)時(shí)，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋?zhuān)詈笤谒鶆澋木�(xiàn)上分散著(zhù)單個(gè)細胞，經(jīng)培養，每一個(gè)細胞長(cháng)成一個(gè)菌落。（圖３－７）
�。�、富集培養法
富集培養法的方法和原理非常簡(jiǎn)單。我們可以創(chuàng )造一些條件只讓所需的微生物生長(cháng)，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競爭，在生長(cháng)能力方面遠遠超過(guò)其他微生物。所創(chuàng )造的條件包括選擇最適的碳源、能源、溫度、光、pH、滲透壓和氫受體等。在相同的培養基和培養條件下，經(jīng)過(guò)多次重復移種，最后富集的菌株很容易在固體培養基上長(cháng)出單菌落。如果要分離一些專(zhuān)性寄生菌，就必須把樣品接種到相應敏感宿主細胞群體中，使其大量生長(cháng)。通過(guò)多次重復移種便可以得到純的寄生菌。
�。�、厭氧法
在實(shí)驗室中，為了分離某些厭氧菌，可以利用裝有原培養基的試管作為培養容器，把這支試管放在沸水0浴中加熱數分鐘，以便逐出培養基中的溶解氧。然后快速冷卻，并進(jìn)行接種。接種后，加入無(wú)菌的石蠟于培養基表面，使培養基與空氣隔絕。另一種方法是，在接種后，利用N2或CO2取代培養基中的氣體，然后在火焰上把試管口密封。有時(shí)為了更有效地分離某些厭氧菌，可以把所分離的樣品接種于培養基上，然后再把培養皿放在完全密封的厭氧培養裝置中。
三、培養
微生物的生長(cháng)，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到許多外界因素的影響，如營(yíng)養物濃度、溫度、水分、氧氣、ＰＨ等。微生物的種類(lèi)不同，培養的方式和條件也不盡相同。
�。�、影響微生物生長(cháng)的因素
微生物的生長(cháng)，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到外界許多因素的影響。影響微生物生長(cháng)的因素很多，簡(jiǎn)要介紹如下。
1)營(yíng)養物濃度
細菌的生長(cháng)率與營(yíng)養物的濃度有關(guān):μ=μmax*C/(K+C)營(yíng)養物濃度與生長(cháng)率的關(guān)系曲線(xiàn)是典型的雙曲線(xiàn)。
K值是細菌生長(cháng)的很基本的特性常數。它的數值很小，表明細菌所需要的營(yíng)養濃度非常之低，所以在自然界中，它們到處生長(cháng)。然而營(yíng)養太低時(shí)，細菌生長(cháng)就會(huì )遇到困難，甚至還會(huì )死亡。這是因為除了生長(cháng)需要能量以外，細菌還需要能量來(lái)維持它的生存。這種能量稱(chēng)為維持能。另一方面，隨著(zhù)營(yíng)養物濃度的增加，生長(cháng)率愈接近最大值。
�。玻囟�
在一定的.溫度范圍內，每種微生物都有自已的生長(cháng)溫度三基點(diǎn)：最低生長(cháng)溫度、最適生長(cháng)溫度和最高生長(cháng)溫度。在生長(cháng)溫度三基點(diǎn)內，微生物都能生長(cháng)，但生長(cháng)速率不一樣。微生物只有處于最適生長(cháng)溫度時(shí)，生長(cháng)速度才最快，代時(shí)最短。超過(guò)最低生長(cháng)溫度，微生物不會(huì )生長(cháng)，溫度太低，甚至會(huì )死亡。超過(guò)最高生長(cháng)溫度，微生物也要停止生長(cháng)，溫度過(guò)高。也會(huì )死亡。一般情況下，每種微生物的生長(cháng)溫度三基點(diǎn)是恒定的。但也常受其它環(huán)境條件的影響而發(fā)生變化。根據微生物最適生長(cháng)溫度的不同，可將它們分為三個(gè)類(lèi)型：a.嗜冷微生物：其是適生長(cháng)溫度多數在-10℃－20℃之間b.中溫微生物：其最適生長(cháng)溫度一般在20℃－45℃之間c.嗜熱微生物：生長(cháng)溫度在45℃以上。
�。常┧�
水分是微生物進(jìn)行生長(cháng)的必要條件。芽孢、孢子萌發(fā)，首先需要水分。微生物是不能脫離水而生存的。但是微生物只能在水溶液中生長(cháng)，而不能生活在純水中。各種微生物在不能生長(cháng)發(fā)育的水分活性范圍內，均具有狹小的適當的水分活性區域。
�。矗┭鯕�
按照微生物對氧氣的需要情況，可將它們分為以下五個(gè)類(lèi)型。a.需氧微生物
這類(lèi)微生物需要氧氣供呼吸之用。沒(méi)有氧氣，便不能生長(cháng)，但是高濃度的氧氣對需氧微生物也是有毒的。很多需氧微生物不能在氧氣濃度大于大氣中氧氣濃度的條件下生長(cháng)。絕大多數微生物都屬于這個(gè)類(lèi)型。b.兼性需氧微生物
這類(lèi)微生物在有氧氣存在或無(wú)氧氣存在情況下，都能生長(cháng)，只不過(guò)所進(jìn)行的代謝途徑不同罷了。在無(wú)氧氣存在的條件下，它進(jìn)行發(fā)酵作用，例如酵母菌的無(wú)氧乙醇發(fā)酵。c.微量需氧微生物
這類(lèi)菌是需要氧氣的，但只在0.2大氣壓下生長(cháng)最好。這可能是由一它們含有在強氧化條件下失活的酶，因而只有在低壓下作用。d.耐氧微生物
這類(lèi)微生物在生長(cháng)過(guò)程中，不需要氧氣，但也不怕氧氣存在，不會(huì )被氧氣所殺死。c.厭氧微生物
這類(lèi)微生物在生長(cháng)過(guò)程中，不需要分子氧。分子氧存在對它們生長(cháng)產(chǎn)生毒害，不是被抑制，就是被殺死。
�。�、培養方法
1）根據培養時(shí)是否需要氧氣，可分為好氧培養和厭氧培養兩大類(lèi)。
好氧培養：也稱(chēng)“好氣培養”。就是說(shuō)這種微生物在培養時(shí)，需要有氧氣加入，否則就不能生長(cháng)良好。在實(shí)驗室中，斜面培養是通過(guò)棉花塞從外界獲得無(wú)菌的空氣。三角燒瓶液體培養多數是通過(guò)搖床振蕩，使外界的空氣源源不斷地進(jìn)入瓶中。
厭氧培養：也稱(chēng)“厭氣培養”。這類(lèi)微生物在培養時(shí)，不需要氧氣參加。在厭氧微生物的培養過(guò)程中，最重要的一點(diǎn)就是要除去培養基中的氧氣。一般可采用下列幾種方法：a.降低培養基中的氧化還原電位：常將還原劑如谷胱甘肽、硫基醋酸鹽等，加入到培養基中，便可達到目的。有的將一些動(dòng)物的死的或活的組織如牛心、羊腦加入到培養基中，也可適合厭氧菌的生長(cháng)。
b.化合去氧：這也有很多方法，主要有：用焦性沒(méi)食子酸吸收氧氣；用磷吸收氧氣；用好氧菌與厭氧混合培養吸收氧氣；用植物組織如發(fā)芽的種子吸收氧氣；用產(chǎn)生氫氣與氧化合的方法除氧。
c.隔絕阻氧：深層液體培養；用石蠟油封存；半固體穿刺培養。
d.替代驅氧用二氧氣碳驅代氧氣；用氮氣驅代氧氣；用真空驅代氧氣；用氫氣驅代氧氣；用混和氣體驅代氧氣。
�。玻└鶕囵B基的物理狀態(tài)，可分為固體培養和液體培養兩大類(lèi)。
固質(zhì)培養：是將菌種接至疏松而富有營(yíng)養的固體培養基中，在合適的條件下進(jìn)行微生物培養的方法。
液體培養：在實(shí)驗中，通過(guò)液體培養可以使微生物迅速繁殖，獲得大量的培養物，在一定條件下，還是微生物選擇增菌的有效方法。
實(shí)驗微生物接種技術(shù)講解3
一、實(shí)驗原理
微生物接種就是在無(wú)菌條件下，用接種工具（針、環(huán)）從一支原菌種中挑取少許菌體，接入到另一支新的培養基上擴大培養的技術(shù)。
要想得到大量的菌種，適應生產(chǎn)、科研和教學(xué)要求，就要進(jìn)行微生物的接種，擴大菌種數量。接種因使用不同容器、不同的培養基，達到不同的目的，而有不同的接種方法，但它們的基本要求是相同的。通常接種都應在空氣經(jīng)過(guò)消毒滅菌的接種室或接種箱或超凈工作臺內完成。
二、實(shí)驗步驟
1.斜面接種
�。�1）左手夾住試管
�。�2）灼燒接種環(huán)
�。�3）拔出棉塞，夾在小指、無(wú)名指上，管口過(guò)火
�。�4）取菌、接種，接種后在火焰上方迅速塞好棉塞
�。�5）寫(xiě)好標簽（菌種名、日期、接種者姓名），貼于斜面正上方前端約1cm處.
�。�6）于37度培養箱中培養24小時(shí)。（全班統一裝入一保鮮袋）
�。�7）一星期后觀(guān)察分離效果，拍照，分析結果
2.平板培養基（平板）制備
�。�1）將滅過(guò)菌的培養皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養基的錐形瓶，左手拔出棉塞。
�。�2）右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過(guò)火焰。
�。�3）用左手的拇指和食指將培養皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養基（約10到20ml）倒入培養皿，左手立即蓋上培養皿的皿蓋。
�。�4）等待平板冷卻凝固。
3.涂布平板法（以小組為單位，對混合菌菌懸液進(jìn)行涂布分離）
(1)用75%酒精或0.01%新潔而滅擦洗雙手,進(jìn)行消毒處理。
�。�2）將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。
(3)取少量菌液滴加到培養基表面。
�。�4）將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8~10s。
�。�5）用涂布器將菌液均勻地涂布在培養基表面，涂布時(shí)可轉動(dòng)培養皿，使菌液分布均勻。
�。�6）將接種好的平板在皿底做好標記。
�。�7）涂布分離的平板全班一起放入保鮮袋中，37度培養箱中倒置培養24h。
�。�8）一星期后以小組為單位觀(guān)察分離效果，拍照，分析結果4.劃線(xiàn)分離：從污染平板中純化細菌菌落（每人1個(gè)平板）
(1)用75%酒精或0.01%新潔而滅擦洗雙手,進(jìn)行消毒處理。
�。�2）將滅過(guò)菌的培養皿放在火焰旁的桌面上，右手拿接種環(huán)，在火焰上灼燒，待冷卻后用接種環(huán)在長(cháng)有混合菌落的平板上挑取少量菌種，用左手的拇指和食指將培養皿打開(kāi)一條縫隙，劃線(xiàn)，其他每區劃線(xiàn)之前一定要把殘余的.菌體燒掉；待接種環(huán)完全能卻后通過(guò)前1區劃線(xiàn)。（一般劃4個(gè)區）
(3)將接種好的平板在皿底做好標記。
�。�4）劃線(xiàn)分離的平板全班一起放入保鮮袋中，37度培養箱中倒置培養48h.
�。�5）一星期后觀(guān)察分離效果，拍照，分析結果
三、實(shí)驗結果
1、斜面接種
實(shí)驗結果及分析：此次斜面接種無(wú)污染，菌體生長(cháng)較旺盛，形成了較多的單菌落，分離效果較好，這與接種場(chǎng)所進(jìn)行了嚴格的消毒處理以及接種操作在超凈工作臺上進(jìn)行，接種前用75%酒精對雙手進(jìn)行了消毒處理，接種工具、管、瓶口接種前后要通過(guò)灼燒滅菌，塞子不能脫手等因素都有關(guān)，有效地防止了雜菌的污染。菌體的生長(cháng)情況跟培養溫度、濕度、pH都有關(guān)。但接種時(shí)沒(méi)有使接種面積達到最大，以至于沒(méi)有最充分地利用培養基，菌體沒(méi)有長(cháng)滿(mǎn)培養基，還有接種時(shí)不小心劃破了培養基的表面，下次做斜面接種時(shí)要注意盡可能地使接種面積達到最大，最充分地利用培養基，還有就是要避免劃破培養基，力求做到操作規范、科學(xué)、準確。
2.涂布平板法
上圖為稀釋100倍的涂布平板法結果
上圖為稀釋1000倍的涂布平板法結果
上圖為稀釋10，000倍的涂布平板法結果
上圖為稀釋100，000倍的涂布平板法結果
實(shí)驗結果與分析：如上4幅圖所示，此次所用菌液中包含兩種菌，即大腸桿菌和蘇云金芽孢桿菌，其中菌落較大、數量較多的為蘇云金芽孢桿菌，而菌落較小、數量較少的為大腸桿菌，說(shuō)明混合菌液中蘇云金芽孢桿菌的濃度較大。經(jīng)稀釋100倍的菌液所生長(cháng)起來(lái)的菌落數量最多，單菌落數量也挺多，但所占的比例不大，特別是蘇云金芽孢桿菌大多數都連在了一起，分離效果不好。經(jīng)稀釋1000倍的菌液所生長(cháng)起來(lái)的菌落數量較多，可以看到蘇云金芽孢桿菌依然連成片，有些大腸桿菌菌落生長(cháng)在蘇云金芽孢桿菌菌落之上，就大腸桿菌而言，單菌落較多，分離效果較稀釋100倍的菌液好。經(jīng)稀釋10，000倍的菌液所生長(cháng)起來(lái)的菌落數量較少，依然有部分蘇云金芽孢桿菌連成了片；大部分大腸桿菌菌落為單菌落，分離效果較好。經(jīng)稀釋10，000倍的菌液所生長(cháng)起來(lái)的菌落數量最少，但蘇云金芽孢桿菌依然連成了片；雖然大腸桿菌的單菌落較少，但分離效果是四個(gè)濃度中最好的。綜上所述，在一定濃度范圍內，稀釋倍數越大，分離效果越好。
3.平板劃線(xiàn)法
實(shí)驗微生物接種技術(shù)講解4
1、定義
是指在執行實(shí)驗過(guò)程中，防止一切微生物侵入機體和保持無(wú)菌物品及無(wú)菌區域不被污染的操作技術(shù)和管理方法；
無(wú)菌操作技術(shù)是微生物實(shí)驗的基本技術(shù)，是保證微生物實(shí)驗準確和順利完成的重要環(huán)節。
2、內容
無(wú)菌操作技術(shù)主要包括兩方面：
1）創(chuàng )造無(wú)菌的培養環(huán)境。包括提供密閉的培養容器、培養容器的滅菌、培養基的滅菌等；
2）在操作和培養過(guò)程中防止一切其它微生物的侵入的措施。包括紫外線(xiàn)殺菌、甲醛熏蒸、超凈臺的消毒與檢測、操作工具、器皿滅菌、操作方法等。
3、無(wú)菌操作原則
1）在執行無(wú)菌操作時(shí)，必須明確物品的無(wú)菌區和非無(wú)菌區，接種時(shí)必須穿工作服、戴工作帽，應在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球將手擦干凈；
2）在操作前20～30分鐘要先啟動(dòng)超凈臺和紫外燈，進(jìn)行接種所用的吸管、平皿及培養基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開(kāi)包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼3次后使用。嚴禁用手直接拿無(wú)菌物品，如瓶塞等，而必須用消毒的鉗、鑷子等；
3）從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)，吸管尖不能觸及試管或平皿邊；
4）接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開(kāi)試管塞都要通過(guò)火焰消毒；
5）接種環(huán)或接種針在接種細菌前應經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必須時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處；
6）吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應用相應的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。傾倒平板應在超凈臺內操作，并且在開(kāi)啟和加蓋瓶塞時(shí)需反復用酒精燈燒。
無(wú)菌操作的環(huán)境要求
1、無(wú)菌室
�。�1）無(wú)菌室的結構：更衣間、緩沖間、操作間；
�。�2）無(wú)菌室的消毒和防污染
每日（使用前）紫外線(xiàn)照射（0.5~1小時(shí)）；
每月用新潔爾滅擦拭地面和墻壁一次的'方式進(jìn)行消毒；
每季度用甲醛、乳酸、過(guò)氧乙酸熏蒸（2小時(shí)），特殊情況下可增加熏蒸頻次。
�。�3）無(wú)菌室使用要求
�、贌o(wú)菌室內應保持清潔，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，拭擦工作臺面，不得存放與實(shí)驗無(wú)關(guān)的物品；
�、跓o(wú)菌室使用前后應將門(mén)關(guān)緊，打開(kāi)紫外線(xiàn)，如采用室內懸吊紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時(shí)間不少于30min，使用紫外燈，應注意不得直接在紫外線(xiàn)下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕拭擦，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線(xiàn)穿透的影響；
�、厶幚砗徒臃N食品標本時(shí)，進(jìn)入無(wú)菌室操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過(guò)小窗傳遞。在無(wú)菌室內如需要安裝空調時(shí)，則應有過(guò)濾裝置。
2、超凈工作臺
超凈臺的使用與保養：
�。�1）風(fēng)速穩定，且符合要求；
�。�2）使用前開(kāi)啟紫外燈照射30分鐘以上；
�。�3）讓超凈臺預工作10－15分鐘；
�。�4）使用完畢后，用70%酒精將臺面和臺內四周擦拭干凈。
3、無(wú)菌器材
�。�1）滅菌器材：玻璃器皿、培養基、無(wú)菌衣等；
�。�2）消毒器材：無(wú)菌室內的凳子、試管架、天平、工作臺、手等。
�。�3）無(wú)菌間一般只允許放置無(wú)菌操作臺、轉椅等物品；無(wú)菌操作臺上一般只允許擺放以下物品：酒精燈、打火機、接種針、消毒棉球、洗耳球、鑷子、油性筆、滅菌平皿、試管架、滅菌吸管、電子天平、250ml滅菌三角瓶、培養基、均質(zhì)器等。
無(wú)菌操作原則
1、無(wú)菌接種操作
培養基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過(guò)滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無(wú)菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養基上，這個(gè)過(guò)程叫做無(wú)菌接種操作。
在實(shí)驗室檢驗中的各種接種必須是無(wú)菌操作。
2、微生物檢驗過(guò)程中的無(wú)菌操作要求
�。�1）在操作中不應有大幅度或快速的動(dòng)作；
�。�2）使用玻璃器皿應輕取輕放；
�。�3）在正火焰上方操作；
�。�4）接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌；
�。�5）在接種培養物時(shí)，協(xié)作應輕、準；
�。�6）不能用嘴直接吸吹吸管；
�。�7）帶有菌液的吸管、玻片等器材應及時(shí)置于盛有5%來(lái)蘇爾溶液的消毒桶內消毒。
3、無(wú)菌操作技術(shù)詳細圖解
�。�1）取菌技巧
�。�2）接種技巧
�。�3）錯誤示范
微生物的接種、分離純化和培養技術(shù)
實(shí)驗微生物接種技術(shù)講解5
1、接種定義
接種：將微生物接到適于它生長(cháng)繁殖的人工培養基上或活的生物體內的過(guò)程叫做接種。
2、接種工具
在實(shí)驗室中，用得最多的接種工具是接種環(huán)、接種針。有時(shí)滴管、吸管也可作為接種工具進(jìn)行液體接種。在固體培養基表面要將菌液均勻涂布時(shí)，需要用到涂布棒。
1．接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.玻璃涂棒 5.接種圈 6.接種鋤 7.小解剖刀
3、微生物檢驗常見(jiàn)接種方法
�。�1）劃線(xiàn)接種法
平板劃線(xiàn)分離法--分區劃線(xiàn)分離法
�、儆媒臃N環(huán)先將培養物涂布于平板1區并作數次劃線(xiàn)，再在2、3……區依次劃線(xiàn)；
�、诿縿澩暌粋�(gè)區域，轉動(dòng)培養皿約70度角，并將接種環(huán)滅菌一次，待冷后再劃下一區域；
�、勖恳粎^域的劃線(xiàn)均接觸上一區域的接種線(xiàn)1～2次，使接種量逐漸減少，以獲得單個(gè)菌落；
�、芷渌僮髋c上述曲線(xiàn)劃線(xiàn)分離法相同。
�。�2）斜面接種法
主要用于經(jīng)劃線(xiàn)分離培養所獲得的`單個(gè)菌落的移種，以及觀(guān)察細菌的某些培養特征。
以菌種移種為例，其接種方法是：
�、偃∫痪N管和培養基管，置左手食指、中指、無(wú)名指間，拇指壓住兩管底部上側面，使菌種管位于外側，培養基管位于內側；
�、谟沂帜粗负褪持阜謩e旋松兩管棉塞�；鹧鏈缇臃N環(huán)；
�、垡杂沂中≈概c手掌，小指與無(wú)名指分別夾取棉塞（先外管后內管），將兩管口迅速通過(guò)火焰1~2次；
�、軐⒁褱缇慕臃N環(huán)伸入菌種管中，從斜面上取菌少許，迅速伸入待接種的培養基管中，在斜面底部向上劃一條直線(xiàn)，然后從底部起向上作曲折連續劃線(xiàn)，直至斜面上方頂端；
�、萑〕鼋臃N環(huán)，火焰滅菌管口，塞上棉塞（先塞內管）；最后將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌放好；
�、拮龊脴俗R，置35℃培養箱中培養18~24小時(shí)。斜面培養一般形成均勻一致的菌苔。一般可觀(guān)察表面、透明度、色澤等特征。
�。�3）涂布接種法
涂布法接種是一種常用的接種方法，不僅可以用于計算活菌數，還可以利用其在平板表面生長(cháng)形成菌苔的特點(diǎn)用于檢測化學(xué)因素對微生物的抑殺效應。
原理：將一定濃度，一定量的待分離菌液移到已凝固的培養基平板上，再用涂布棒快速地將其均勻涂布，使長(cháng)出單菌落而達到分離的目的。
�。�4）液體接種法（肉湯接種）
�、偃缧泵娼臃N法持好菌種管及培養基管；
�、跍缇臃N環(huán)，從菌種管取菌，伸入培養基管中，在接近液面的管壁上方輕輕研磨，并沾取少許培養基液體調和，使細菌混合于培養基的液體中。液體培養基一般以18~24小時(shí)培養后觀(guān)察生長(cháng)特征。
肉湯培養可觀(guān)察如下幾項：
a.發(fā)育程度：有無(wú)生長(cháng)、微弱、中等、旺盛；
b.混濁度：有無(wú)及程度（混、中等、微混、透明）、均勻混濁、有顆粒、絮狀生長(cháng)；
c.沉淀：有無(wú)及量多少、性狀（粉狀、顆粒狀、絮狀、沾性）；
d.表面：有無(wú)生長(cháng)、性狀（膜狀、環(huán)狀）、菌膜厚薄及表面特征（光滑、顆粒、皺狀）；
e.其他：有無(wú)特殊氣味，色素。如果是糖發(fā)酵培養基則主要觀(guān)察是否產(chǎn)酸和有無(wú)氣體。
�。�5）穿刺接種法（半固體接種）
多用于保存菌種、觀(guān)察動(dòng)力及厭氧培養等也可以用于觀(guān)察細菌的某些生化反應。
�、偃缧泵娼臃N法持好菌種管及培養基管；
�、谝詼缇臃N針從菌種管取菌，垂直刺入培養基的中心（半固體或一般瓊脂高層）直達近管底部（但不能完全刺到管底），接種針應沿原路退出；
�、劢�(jīng)培養后半固體培養基可觀(guān)察到：沿穿刺線(xiàn)生長(cháng)，線(xiàn)外的培養基清亮表示細菌無(wú)動(dòng)力；穿刺線(xiàn)模糊不清，或沿穿刺線(xiàn)向外擴散生長(cháng)，或整個(gè)培養基混濁表示細菌有動(dòng)力。